细胞分离有什么作用?

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在实验室中经常需要分离细胞,获取单细胞供进一步研究使用. 获取单细胞的手段有很多,今天介绍两种比较流行的方法——显微操作法和流式细胞仪法。

1、显微操作法(microsurgery) 用显微镜引导,将细小的物体移植到目标位置。在细胞生物学和免疫学等实验中常被用于从组织切片中挑取单个细胞进行培养或者鉴定细胞表面抗原的表达情况。具体操作为:先在载玻片上轻轻放上一薄层水,用显微镜找到欲获取的细胞,用注射器吸取少许胰蛋白酶液(0.25%,pH7.4)置于细胞上,待细胞稍受腐蚀后迅速用水冲洗掉胰蛋白酶液,再用培养液清洗两遍即成。该方法获得的细胞存活率可达95%以上。 缺点是操作过程中细胞可能会受到挤压损坏或吸附于器皿上而未能分离下来;另外,对细胞损伤较大,通常适用于容易受损的细胞。

2、流式细胞仪法(flow cytometry) 利用流式细胞仪可以方便地实现单细胞的分离。其基本原理为:细胞悬浮在液体中时,由于细胞有一定体积,故当液体不停地流动时,不同的细胞因为大小不同会在玻璃管中上下运动,而细胞内的颗粒物质因不能通过细胞膜而被阻留,使细胞成为“空心”的球体。流式细胞仪所发射的光被细胞中的颗粒物质所阻留,而细胞周围的透明水相则得以通过,这样在光路的末端就形成了“亮斑”,每一个细胞都有一个相应的亮斑,可以根据光的波长和荧光强度准确区分各种细胞。最后收集有特定功能的细胞群即可。

此方法无需显微镜就能将单个细胞分开,并可在不加血清和培养液的条件下进行分离,因此特别适合于不易损伤的细胞,如哺乳动物细胞。但有时也会因细胞在分离过程中接触化学药品而导致某些细胞死亡。 随着科学技术的发展,新的技术不断出现,可能会有更多更好的方法被人们所运用。

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