参比溶液的作用是什么?

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参比溶液,简言之就是测量过程中作为“标准”的溶液。 在光谱测定中,被测量的样品本身一般是不透明的,因此无法直接测量其吸收度。需要将样品和一定浓度的参比溶液同时放入仪器的接受器内,检测器测定经过适当处理的待测样液与参比样液的吸光度,以之来计算待测样液的浓度。 由于不同波长的光在溶液中的传播能力(即光透过率)是不一样的,因此选用什么颜色的染料做参比溶液是十分重要的。一般选用与被测溶液接近颜色的染料溶液作参比,如果颜色差异较大,则会影响测试结果,使得测试误差增大。

通常所用的参比剂有苯二甲胺蓝、结晶紫、甲酚红等;若用乙腈稀释后染色剂的溶液为参比剂;此外也可直接用无水乙醇或二氯甲烷做参比剂。 在酶免疫分析中,为了消除非特异性吸附带来的干扰,除需要制备特异性的抗体外,还要使用相应的参比抗体(ConA)来测定抗体的相对含量。这是因为,虽然抗体制备中常用的佐剂可刺激细胞产生一定的抗体,但此抗体的存在形态主要为可溶型,而非Immunoglobulin G(IgG)型抗体。而在检测时,往往更关注具有特异性结合能力的免疫球蛋白的存在形式,如没有相应的ConA存在,则不能完全与被检物体发生反应。

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参比溶液简称参比液,亦称空白溶液(blank solution)。在分光光度分析中,为了定量的测定有色溶液的吸光度,必须设置同一条件下的参比溶液,将测定的有色溶液对某一波长光的吸光度,归一到单位浓度,单位液层厚度时的吸光度,即得该物质在该波长,该介质中的摩尔吸光系数。

为了消除试样溶液本底(如溶剂、共存组分或其中某些组分等)对入射光的反射、折射、吸收和散射等光程因素对测定所造成的干扰,而在比色皿中放入适当参比溶液,测定其吸收光谱并与被测溶液的吸收光谱相重叠(参比溶液的吸收光谱应与被测溶液的处于同一波长区域且在该波长处无吸收或吸光度很小),从而能准确的找到被测溶液的最大吸收波长来进行测定。

在分光光度计中放入参比溶液,调节仪器使透光率为100%(或吸光度为0),这时认为被参比溶液吸收和/或散射的光均为100%吸收,然后放入被测溶液,所测得的吸光度就仅仅是被测溶液对光吸收和/或散射所产生的。

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