参比溶液的作用是什么?
参比溶液,简言之就是测量过程中作为“标准”的溶液。 在光谱测定中,被测量的样品本身一般是不透明的,因此无法直接测量其吸收度。需要将样品和一定浓度的参比溶液同时放入仪器的接受器内,检测器测定经过适当处理的待测样液与参比样液的吸光度,以之来计算待测样液的浓度。 由于不同波长的光在溶液中的传播能力(即光透过率)是不一样的,因此选用什么颜色的染料做参比溶液是十分重要的。一般选用与被测溶液接近颜色的染料溶液作参比,如果颜色差异较大,则会影响测试结果,使得测试误差增大。
通常所用的参比剂有苯二甲胺蓝、结晶紫、甲酚红等;若用乙腈稀释后染色剂的溶液为参比剂;此外也可直接用无水乙醇或二氯甲烷做参比剂。 在酶免疫分析中,为了消除非特异性吸附带来的干扰,除需要制备特异性的抗体外,还要使用相应的参比抗体(ConA)来测定抗体的相对含量。这是因为,虽然抗体制备中常用的佐剂可刺激细胞产生一定的抗体,但此抗体的存在形态主要为可溶型,而非Immunoglobulin G(IgG)型抗体。而在检测时,往往更关注具有特异性结合能力的免疫球蛋白的存在形式,如没有相应的ConA存在,则不能完全与被检物体发生反应。